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人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(貼壁)

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更新時(shí)間:2025-06-24
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細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟:
1.將冷凍管迅速由液氮轉(zhuǎn)入到37℃水浴中,冷凍管的頂部保持在水面以上以避免任何污染,不定時(shí)攪拌加速解凍;
2.當(dāng)細(xì)胞*解凍后,用含70%乙醇的紗布擦拭冷凍管消毒;
3.將解凍后細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含4℃預(yù)平衡培養(yǎng)液的試管中;
4.細(xì)胞懸液在4℃下200磄離心10分鐘;
5.棄上清,將細(xì)胞重新懸浮在新鮮培養(yǎng)液中;
6.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到細(xì)胞培養(yǎng)瓶,CO2孵箱中培養(yǎng);
7.是用倒置顯微鏡檢查細(xì)胞存活率以及細(xì)胞密度,如果細(xì)胞密度過高,用培養(yǎng)液稀釋至適宜濃度。

培養(yǎng)條件:
*培養(yǎng)基:DMEM高糖培養(yǎng)基90%;胎牛血清10%。
培養(yǎng)條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%

傳代方法:
收到細(xì)胞后,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。 (一)如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿,用75%酒精噴灑整 個(gè)瓶消毒后放到超菌 臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,僅留下 10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼 續(xù)培養(yǎng)。
(二)如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中, 倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,然后又 將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30 秒后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓分 散,輕敲幾下培養(yǎng) 培養(yǎng)瓶,細(xì)胞隨即脫落下來(lái)。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基,吸出,分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6 傳代;2~3天1次。

注意:傳代后一半用我們的培養(yǎng)基,一半用你們的,以免細(xì) 胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好。
凍存方法:凍存液:基礎(chǔ)培養(yǎng)基 +5%DMSO+20%FBS 
儲(chǔ)存:液氮儲(chǔ)存

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